拒絕污染與變性！離心機(jī)分離要點(diǎn)總結(jié)

發(fā)布時(shí)間：

2021-03-01

概要：

　　從相關(guān)文獻(xiàn)資料了解到離心機(jī)的離心分離方法還是以它的分離范圍廣，容量等優(yōu)勢存在著；可以研究天然生物大分子的流體動(dòng)力學(xué)特性；可以在電離介質(zhì)中進(jìn)行生物大分子的片段分離；對緩沖劑限制很小（在電泳技術(shù)中由于電流的熱效應(yīng)而限制了緩沖劑的使用）等等。另外在各種實(shí)驗(yàn)方法的前處理階段，離心法還是被廣泛的使用著。考慮到各個(gè)研究部門的設(shè)備分布情況，在很多條件下，離心分離的使用還具有相當(dāng)?shù)膹V泛性。作為有效的分離純化方法，差分離心、速率區(qū)帶密度梯度離心和等密度離心在生物大分子的研究中還占有重要地位。

　　離心機(jī)分離要點(diǎn)：

　　1）防止污染：

　　要避免在實(shí)驗(yàn)過程中由于生物大分子部分受損而引起降解或變性，引起降解的原因很多，如實(shí)驗(yàn)過程中的外力作用；某些酶污染等等，但最常見的原因是酶的作用。

　　實(shí)驗(yàn)過程中由于污染某些脫氫酶進(jìn)入樣品而使生物大分子變性。

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　　（2）避免變性的其他注意事項(xiàng)：

　　（i）轉(zhuǎn)頭在離心前預(yù)冷到接近離心溫度（在冰箱中放置過夜，或在恒溫箱中保溫）。對于超速離心機(jī)，其制冷系統(tǒng)主要用于抵消轉(zhuǎn)頭在稀薄空氣中高速運(yùn)轉(zhuǎn)（轉(zhuǎn)頭表面線速度從亞因速—>超因速）時(shí)氣動(dòng)力摩擦產(chǎn)生的熱量。在真空中，只有輻射傳熱的情況下，高速運(yùn)轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)頭溫度從室溫（如夏天30~35℃）降到5℃時(shí)間很長（如1 小時(shí)左右）一般應(yīng)預(yù)冷到接近離心溫度（±2℃）以確保在離心的最初階段（15 分鐘以內(nèi)）轉(zhuǎn)頭溫度和樣品溫度一致。

　　（ii）用固定角式或近垂直管轉(zhuǎn)頭或垂直管轉(zhuǎn)頭作梯度離心時(shí)必須利用離心機(jī)的慢加速（0~500rpm ）、慢減速（500rpm~0）功能，以保證梯度方向的順利轉(zhuǎn)換。

　　（iii）離心開始、離心結(jié)束都要小心地輕放和輕取離心管，避免大的震動(dòng)。

　　（iv）卸樣過程應(yīng)在無震動(dòng)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行，環(huán)境溫度和離心溫度相近，卸樣方法應(yīng)選擇平穩(wěn)、外力作用很小的方式，盡可能不用泵輸送樣品。

　　3）梯度離心也有其相關(guān)要點(diǎn)，這一塊內(nèi)容相對復(fù)雜，要參考很多文獻(xiàn)資料，感興趣得朋友可以自行去了解一下：

　　（1）B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

　　（2）M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

　　（3）D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

　　（4）C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

　　（5）余興明，"質(zhì)粒DNA的超速離心分離""生命的化學(xué)"1994.1

　　（6）余興明"血清脂蛋白的離心分離""生命的化學(xué)"1997.3

　　（7）余興明"離心技術(shù)"設(shè)備與方法概論上海生物物理學(xué)會(huì)1986，1993年）。

　　以上就是關(guān)于離心機(jī)得簡單解說，離心機(jī)雖然只是一款小型分離設(shè)備，但是它得作用，價(jià)值，是很大得，所以要多了解離心機(jī)才能多發(fā)掘它得作用與價(jià)值！