離心機(jī)是蛋白表達(dá)通關(guān)裝備之一

發(fā)布時(shí)間：

2020-12-17

概要：

想要通關(guān)蛋白表達(dá)少不了離心機(jī)。常言道細(xì)節(jié)決定成敗，尤其像蛋白表達(dá)提純這樣復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)。一個(gè)操作上的小失誤，可能直接影響最終結(jié)果。

　　雖然可以大致分為三步，表達(dá)、分離、純化，但是這個(gè)過程十分繁瑣。

　　蛋白表達(dá)前期還有一系列復(fù)雜過程，耗費(fèi)時(shí)間也長，到最后一步，還不能放松警惕。

　　蛋白進(jìn)行純化是通關(guān)的最后一步，選擇合適的純化方法，可以提高蛋白的純化效率，讓蛋白純化簡(jiǎn)單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。

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　　親和層析

　　親和層析純化是利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應(yīng)的分子專一性可逆結(jié)合的特性進(jìn)行蛋白純化的技術(shù)。

　　離子交換層析

　　離子交換層析是一種依據(jù)蛋白表面所帶電荷量不同進(jìn)行蛋白分離純化的技術(shù)。

　　凝膠過濾層析

　　凝膠過濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。

　　疏水作用層析

　　疏水作用層析是利用鹽-水體系中樣品分子的疏水基團(tuán)和層析介質(zhì)的疏水配基之間疏水力的不同而進(jìn)行分離的一種層析方法。

　　雖然方法多種多樣，但是，都需要用離心機(jī)來進(jìn)行分離純化。

　　用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導(dǎo)為例：

　　1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5 mL LB液體培養(yǎng)基中（含100 ug/mL 氨芐青霉素），37℃震蕩培養(yǎng)過夜。

　　2.按1∶50或1：100的比例稀釋過夜菌，一般轉(zhuǎn)接1 mL過夜培養(yǎng)物于100 mL（含100 ug/mL 氨芐青霉素）LB液體培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 = 0.6 - 0.8（最好0.6，大約需3 h）。取10 ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。

　　3.對(duì)照組不加誘導(dǎo)劑，實(shí)驗(yàn)組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l，37℃繼續(xù)培養(yǎng)1-3h。

　　4.離心機(jī)12000 rpm 離心10 min，棄上清，菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。

　　以上就是關(guān)于蛋白表達(dá)的通關(guān)講解，本文重點(diǎn)就是要表達(dá)，一個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗，細(xì)節(jié)很關(guān)鍵，雖然人工方面是可以人為把控的，但是輔助設(shè)備的細(xì)節(jié)，還是要多加注意，選一臺(tái)合適的離心機(jī)很關(guān)鍵。

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